酶標板封閉前的清洗
酶標板或者又叫做一次性(細胞細菌)培養板,基本都是透明顏色,PS(聚苯乙烯)材料做成,一般根據酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,分為高結合力,中結合力和氨基化的。
1)高結合力
此種酶標板,表面經處理后,其蛋白結合能力大大增強,可達300-400ng lgG/cm2主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產生非特異性反應??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
2)中結合力
此類酶標板經表面疏水鍵被動與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng 1gG/cm2,由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3)氨基化
這種酶標板經表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯劑共價結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯劑中任何功能基團發生作用。
等離子體清洗可以對酶標板材料的整體、局部或復雜結構部分進行清洗;在完成清洗去污的同時,還可以改善材料本身的表面性能。如提高表面的潤濕性能、改善膜的黏著力等,這在酶標板的加工制造過程中是非常重要的
聚苯乙烯酶標板經等離子接枝處理后,能在基體表面引入醛基、氨基、環氧基等活性官能團,提高基體表面的浸潤性、表面能,使酶牢牢地固定在載體上面,提高酶的固定性。經達因筆測試,PS材料處理前是38達因左右,處理后是72達因左右,表面張力值得到極大的改善。